色譜柱的日常維護(hù)保養(yǎng)

　　色譜柱利用色譜柱先將混合物分離，然后利用檢測器依次檢測已分離出來的組分。色譜柱的直徑為數(shù)毫米，其中填充有固體吸附劑或液體溶劑，所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定相相對應(yīng)的還有一個(gè)流動相。流動相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體，一般為氮或氫氣。待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動相，流動相帶著樣品進(jìn)入色譜柱，故流動相又稱為載氣。載氣在分析過程中是連續(xù)地以一定流速流過色譜柱的;而樣品則只是一次一次地注入，每注入一次得到一次分析結(jié)果。

　　在實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)常遇到的情況：

　　·新的色譜柱，直接上分析條件來分析樣品，發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。

　　·新的色譜柱，使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。

　　·新的色譜柱，發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。

　　·色譜柱使用不頻繁，一開始分析樣品效果比較好，但是，在使用過程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。

　　·色譜峰形異常，基線不穩(wěn)。

　　當(dāng)發(fā)生以上情況，請仔細(xì)檢查，是否有某個(gè)操作疏忽了?

　　1)測試柱性能

　　通常情況下，我們建議用戶在拿到色譜柱后，這件事情就是在一臺性能完好的儀器系統(tǒng)上，按照廠家說明書對色譜柱進(jìn)行柱效測試。其實(shí)，對于一個(gè)合格的色譜分析工作者來說，拿到一根新色譜柱，要開始一個(gè)課題之前，都會這樣做，目的有二：1、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。2、將檢測結(jié)果小心保存， 當(dāng)實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，在檢測柱效進(jìn)行對比，來進(jìn)一步排查原因。

　　2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí)，注意過渡

　　在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí)，一定要注意應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，造成系統(tǒng)堵塞。另外，在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí)，要仔細(xì)檢查，段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。

　　3)當(dāng)更換色譜柱時(shí)，原來的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化

　　首先，如果之前開發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過別的樣品，那么之前的樣品或使用的流動相對這個(gè)樣品分析可能有干擾，只能重新找條件。建議：開發(fā)方法時(shí)使用新的色譜柱。(其次，如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況，可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同，造成了選擇性的細(xì)微差異 ，需要調(diào)整條件，并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會改變)。再次，如果是更換了同品牌型號的新的色譜柱發(fā)生這種情況，請檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5)，如果一開始只是勉強(qiáng)分開(Rs小于1.5)，那只能說明方法沒有優(yōu)化好，需要再次進(jìn)行優(yōu)化。

　　4)樣品及前處理

　　樣品要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純，配流動相的水是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

　　5)色譜柱基線問題

　　通常情況，基線問題是由于系統(tǒng)或者流動相引起的，和色譜柱關(guān)系不大。

　　可能導(dǎo)致的原因：

　　(1)泵頭進(jìn)氣泡

　　(2)系統(tǒng)污染

　　(3)流通池漏液

　　(4)流動相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測波長不合適)

　　(5)檢測波長低，水的質(zhì)量不好等等。

　　6)色譜柱沖洗保養(yǎng)

　　當(dāng)使用了緩沖液或含鹽的流動相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇水溶液沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入至少10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。還有就是不能在這個(gè)工作上面打折扣，否則，一些保留強(qiáng)的雜質(zhì)沒有洗脫下來，只能是給后面的工作帶來更大的麻煩。如色譜柱要長時(shí)間保存，可以儲存于純甲醇或乙腈中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。